高效液相
色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点。
1.进样系统gDr检测VBA
一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。gDr检测VBA
2.输液系统gDr检测VBA
该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47～4.4X107Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。gDr检测VBA
3.分离系统gDr检测VBA
该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10～50cm(需要两根连用时，可在二者之间加一连接管)，内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成).固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样)，或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。gDr检测VBA
另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C，通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。gDr检测VBA
标签: 高效液相色谱仪
高效液相色谱仪高效液相色谱仪的组成及特点_高效液相色谱仪
安捷伦液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。gDr检测VBA
*：安捷伦液相色谱仪安装条件gDr检测VBA
一、环境要求：gDr检测VBA
1、温度：15～30℃gDr检测VBA
2、日温差：±3℃gDr检测VBA
3、相对湿度：20%～85%gDr检测VBA
4、地面：平滑、不易起尘gDr检测VBA
5、安装场所： 无震动、周围无腐蚀性介质、无电磁场干扰，操作台纵深尺寸60cm以上，避免空调直吹风，避免直射阳光。gDr检测VBA
6、推荐液相色谱仪工作台：长2米、宽0.8米，承重大于80公斤。建议离墙距离0.3米以上。gDr检测VBA
一般在安装的实际空间上，还要考虑：gDr检测VBA
与其它仪器间距大于60cm，仪器后面板应留有不小于50cm的空间，前面板至操作台边缘距离不小10cm；仪器安装平稳牢固，接入了UPS电源，仪器外壳与地线连接。gDr检测VBA
二、电源要求：gDr检测VBA
1、单相交流220V，(+5%～-10%)，50～60Hz，有单独的良好接地。gDr检测VBA
2、若电压不稳，需配置稳压电源，功率大于2.5千瓦。gDr检测VBA
3、准备1个合格的万用接线板，总数不小于5个扁平三角接线插座。gDr检测VBA
4、断电续电能力：断电情形，设备能持续运行1小时以上。gDr检测VBA
5、接地：安装场所应有可靠接地线装置gDr检测VBA
三、溶剂要求：gDr检测VBA
1、二次重蒸馏水，1000毫升以上(建议用0.45微米水相滤膜过滤)。gDr检测VBA
2、乙腈或甲醇(色谱纯或优级纯)，1500毫升以上(建议用0.45微米有机相滤膜过滤)。gDr检测VBA
四、操作系统：Windows XP 操作系统gDr检测VBA
硬件要求：内存不低于2G；硬盘不低于160G；配有网络适配器(2个网卡)；带光区驱动gDr检测VBA
第二、安捷伦液相色谱仪安装方法：gDr检测VBA
1、液相色谱柱的结构：gDr检测VBA
a、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。gDr检测VBA
柱接头采用低死体积结构，柱接头是两端螺纹组件，一端是为7/16英寸外螺纹，另一端是3/16英寸的内螺纹(国内外已规范化)。7/16英寸外螺纹与1/4英寸柱管(Φ6.35mm)连接，中间放置压坏用于密封。3/16英寸的内螺纹与1/16英寸(Φ1.57mm)的连接管连接，中间也放置压环用于柱接头的密封。为了尽量减少柱外死体积，在安装色谱柱时，用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底，然后再拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上(连接管通过压环后露出的管长度应严格控制在2.5mm长或其他固定尺寸)。gDr检测VBA
在两端柱接头内，柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网)，用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316#不锈钢材质，能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。gDr检测VBA
b、柱填料：gDr检测VBA
液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。gDr检测VBA
正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3—10 μm的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。gDr检测VBA
反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。gDr检测VBA
常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10 μm之间。gDr检测VBA
2，色谱柱的安装：gDr检测VBA
a、拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。gDr检测VBA
b、拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。gDr检测VBA
c、 按柱管上标示的流动相流向，将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接(如条件允许，建议在柱前使用保护柱)；柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57mm、内径为0.1-0.3mm的不锈钢管。连接管的两端均有空心螺钉及密封用压环。在接管时一定要设法降低柱外死体积。连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底，然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动为止，再用扳手继续顺时针拧1/4-1/2圈，切记不要用力过大。如色谱柱通过流动相加压后有漏液现象，请用扳手继续顺时针拧1/4圈，直至不漏液为止。gDr检测VBA
第三、液相色谱柱的使用：gDr检测VBA
色谱柱在使用前，进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是zui佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。gDr检测VBA
1、样品的前处理：gDr检测VBA
a、使用流动相溶解样品。gDr检测VBA
b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。gDr检测VBA
c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。gDr检测VBA
2、流动相的配制：gDr检测VBA
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：gDr检测VBA
a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。gDr检测VBA
b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。gDr检测VBA
c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。gDr检测VBA
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，使用对紫外吸收较低的溶剂配制。gDr检测VBA
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。gDr检测VBA
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。gDr检测VBA
3、流动相流速的选择：gDr检测VBA
因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求zui佳柱效，使用zui佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml/min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml/min为佳。gDr检测VBA
当选用zui佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。gDr检测VBA
注意：gDr检测VBA
a.由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。gDr检测VBA
b.对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。用水使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。gDr检测VBA
c.含水流动相在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要放置时间过长。加入叠氮化钠，防止细菌生长。gDr检测VBA
d.流动相要求使用0.45 μm滤膜过滤，除去微粒杂质。gDr检测VBA
e.使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。gDr检测VBA
4、柱性能测试：gDr检测VBA
启动液相色谱仪：a、流动相流速设定为1ml/min。gDr检测VBA
b、UV检测器波长设定为254nm。gDr检测VBA
使用出厂测试时使用的流动相组成及测试样品。gDr检测VBA
记录并计算测试结果。
