关于维生素A的含量测定方法及操作规程

时间：2025-04-18 21:09:57 来源：作者：

关于维生素A的含量测定方法

　　因为含维生素A原料中常常混有许多杂质，包括异构体，氧化降解产物，合成中间体，副产物等有关物质，且含有稀释用油，这些杂质在紫外区也有吸收，导致在维生素A最大吸收波长处测得的吸光度并不是维生素A独有的吸收，为了消除其他物质引起的误差，所以采用三点校正法。l7i检测VBA

　　三点波长的选择原则：一点选在维生素A的最大吸收波长处，其他的两点各在这一波长两侧选一点。这两点有两种选择方法，第一种是等波长差法，即最大吸收波长为328nm，左侧一点为316nm，右侧一点为340nm.这是10版药典规定测定维生素A醋酸酯的方法。第二种方法是等吸收比法，即左右两波长处的吸光度相等等于最大吸收波长处吸光度的七分之六。10版药典规定测定维生素A醇时用此方法。l7i检测VBA

　　1．原理l7i检测VBA

　　维生素A的异丙醇溶液在325 nm波长下有最大吸收峰，其吸光度与维生素A的含量成正比。本法的灵敏度较比色法高，可测定维生素A含量低于5?g／g的样品。主要缺点是在维生素A最大吸收波长325 nm附近许多其他化合物也有吸收，干扰测定，故本法适用于透明鱼油，维生素A的浓缩物等纯度较高的样品。对于一般样品，测定前必须先将脂肪抽提出来进行皂化，萃取其不皂化部分，再经柱层析除去干扰物。l7i检测VBA

　　2．仪器l7i检测VBA

　　紫外分光光度计; UV-1100;UV-1200。l7i检测VBA

　　3．试剂l7i检测VBA

　　①异丙醇。l7i检测VBA

　　②维生素A标准溶液：称取1 g相当于50 000国际单位维生素A的浓鱼肝油0．1000 g，加异丙醇溶解，定容至125 mL。此溶液1 mL相当于40国际单位(即40 IU．mL-1)。l7i检测VBA

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　　4.测定步骤l7i检测VBA

　　①标准曲线绘制：分别取维生素A标准溶液(40 IU·mL-1)O．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、4.0 mL，于10 mL棕色容量瓶中，用异丙醇定容。以空白液调仪器零点，于紫外分光光度计上在325 nm波长下分别测定吸光度，绘制标准曲线。l7i检测VBA

　　②样品测定：称取适量样品，按照三氯化锑比色法进行皂化、提取、洗涤、浓缩、蒸发醚层后，迅速用异丙醇溶解并移人50 mL容量瓶中，用异丙醇定容，于紫外分光光度计325nm处测定其吸光度，从标准曲线上查出相当的维生素A含量。l7i检测VBA

　　5．计算X=[(c*V)/m]*100l7i检测VBA

　　式中：l7i检测VBA

　　X——样品维生素A的含量，IU·(100 g) -1；l7i检测VBA

　　c——由标准曲线查得的维生素A含量，IU·mL-1；l7i检测VBA

　　V——样品的异丙醇溶液体积，mL；l7i检测VBA

　　m——样品质量，g。l7i检测VBA

　　为何不直接以紫外可见分光光度法测定维生素A的含量,而要采用较为繁琐的三点校正法l7i检测VBA

　　牛胸腺DNA 钠盐溶液（pH = 7.0）ε（ρ）= 6 600,DNA 含磷量9.2%,含1μg/mL DNA 钠盐溶液光密度0.020.RNA 溶液（pH = 7.0）ε（ρ）= 7 700~7 800,RNA 含磷量9.5%,含1μg /mL RNA 溶液光密度0.022~0.024.采用紫外光光度测定核酸含量,通规定：260nm 波,浓度1μg/mL DNA 溶液其光密度0.020,浓度1μg/mL RNA 溶液其光密度0.024.,测定未知浓度DNA （RNA）溶液光密度OD260nm,即计算测其核酸含量.该简单、快速、灵敏度高,核酸3μg／mL 含量即测.于含微量蛋白质核苷酸等吸收紫外光物质核酸品,测定误差较,若品内混杂量述吸收紫外光物质,测定误差较,应设事先除.l7i检测VBA

　　由于降解或水解作用,核酸光密度增高约40％,众所周知增色效应（hyperchromic effect）.核酸,氢键π-键相互作用改变碱基共振行.,核酸光密度低于构核苷酸光密度,该现象称减色效应（hypochromic effect）.l7i检测VBA

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紫外分光光度计关于维生素A的含量测定方法_紫外分光光度计

紫外分光光度计的操作注意事项

紫外分光光度计就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。紫外分光光度计可以在紫外可见光区任意选择不同波长的光。物质的吸收光谱就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量。l7i检测VBA

紫外分光光度计.jpg l7i检测VBA

    紫外分光光度计的操作要点：
    启动仪器之前，一定要把样品室内存放的防潮剂拿出，仪器进行正常运转检查的时候，千万不能开启样品室盖；要求比色皿当中的液体占总体积的66%-80%较佳，千万不能让液体太多，以致于液体外泄腐蚀仪器；正常检测的时候，需要保证比色皿干净，内壁上液滴需要使用专业的纸进行擦拭，千万不能使用手进行直接的擦拭，容易对使用人员的手造成伤害，相信没有人希望这样的事情发生。
    在正常运转的时候，严禁把液体溶剂放置于仪器的表层上，如果出现液体外泄的情况，一定要保证进行及时的清洁处理。当检测完毕之后，需要及时将比色皿内的液体处理掉，使用蒸馏水将其清理干净，同时倒置进行晾干处理。最后需要将仪器的电源关闭，把防潮剂放入到样品室内，做好防尘处理，等到管理人员同意方可离去。
    紫外分光光度计的日常维护：
    一、温度和湿度是影响仪器性能的重要因素。他们可以引起机械部件的锈蚀，使金属镜面的光洁度下降，引起仪器机械部分的误差或性能下降；造成光学部件如光栅、反射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀，产生光能不足、杂散光、噪声等，甚至仪器停止工作，从而影响仪器寿命。维护保养时应定期加以校正。应具备四季恒湿的仪器室，配置恒温设备，特别是地处南方地区的实验室。
    二、环境中的尘埃和腐蚀性气体亦可以影响机械系统的灵活性、降低各种限位开关、按键、光电偶合器的可靠性，也是造成必须学部件铝膜锈蚀的原因之一。因此必须定期清洁，保障环境和仪器室内卫生条件，防尘。
    三、仪器使用一定周期后，内部会积累一定量的尘埃，可以由维修工程师或在工程师指导下定期开启仪器外罩对内部进行除尘工作，同时将各发热元件的散热器重新紧固，对光学盒的密封窗口进行清洁，必要时对光路进行校准，对机械部分进行清洁和必要的润滑，最后，恢复原状，再进行一些必要的检测、调校与记录。l7i检测VBA