液相色谱仪保留时间漂移处理办法液相色谱解决方案

时间：2025-04-17 21:04:12 来源：作者：

　　保留时间是指溶质通过色谱柱所需时间，即待测组分从进样到出现峰大值所需的时间。保留时间是由色谱过程中的热力学因素所决定，在一定的色谱操作条件下，任何一种物质都有一确定的保留时间，有着类似于比移值相同的作用，可作为色谱定性分析的依据。换言之，如果保留时间出现漂移问题，那么检测结果也会随之受到影响。

　　保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种东西，两次的保留时间相差不要超过15s，超过了半分钟可看做保留时间漂移，就无法进行定性。这里小编就列举几个保留时间漂移的的原因和解决方法。

　　1色谱柱平衡

　　如果观察到保留时间漂移,首先应考虑色谱柱是否已经平衡。在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。通常平衡需要10～20个柱体积的流动相,但如果在流动相中加入少量添加剂(如离子对试剂)则需要相当长的时间来平衡色谱柱。流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上,从而造成保留时间的漂移。应注意:水是很容易污染的流动相成分。

　　2固定相稳定性

　　固定相的稳定性都是有限的,即使在推荐的pH范围内使用,固定相也会慢慢水解。例如,硅胶基质在pH4时水解稳定性好,水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定;长链键合相比短链键合相稳定;烷基键合相比氰基键合相稳定的多。经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解,如氨基键合相等。

　　3色谱柱污染

　　保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器,它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是:流动相本身,流动相容器,连接管、泵、进样器和仪器密封垫,以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分,就可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质,如:配药中的赋形剂,生化样品(如血清)中的蛋白及类脂类化合物,食品样品中的淀粉,环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量,在此情况下,保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加,可以通过使用固相提取( SPE)等样品前处理方法来去除样品基质的影响,避免色谱柱污染简单的方法是防患于未然。相比之下,找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂,但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物,但蛋白在THF中就不能溶解, DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。

　　4流动相组成

　　流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等,应防止流动相由于蒸发、反应等等原因造成的变化。

气相色谱和液相色谱微型化中的关键问题

　　在器微型化过程中,尺寸的缩小不仅要考虑材料的性质和制造上的可能,还要从原理上考虑尺寸缩小后所带来的一系列问题。这些问题包括：mZM检测VBA

　　（1）分离系统中被分配的分子个数是否大于106,因为只有大于106才能得到符合统计结果的数据;mZM检测VBA

　　（2）因分离通道尺寸缩小,自然提高了单位柱长的效率,但是总长度的减少可能使总分离效能远低于常规;mZM检测VBA

　　（3）对于质量敏感型检测器,经过分离柱后单位时间内到达检测器的分子个数是否满足检测原理所要求的最小数目;mZM检测VBA

　　（4）对于浓度型检测器,到达检测池的分子数目是否能满足符合统计规律的分子数目;mZM检测VBA

　　（5）检测微区内的外加能量密度是否超过被检测分子所能承受的极限;mZM检测VBA

　　（6）微量流动相的输送与控制;mZM检测VBA

　　（7）因材料尺寸的缩小,表面层氧化或腐蚀对器件功能的影响。最后,色谱仪器微型化所带来的好处不仅仅是单位长度分离效率的提高,而是总分离能力的保持甚至提高;不仅仅是分离系统或某个部件的微型化,而是整体的微型化;不仅仅是质量灵敏度的提高,而是浓度灵敏度的保持或提高;不仅仅是能量和物质的低消耗,而是使用的方便和友好;不仅仅是整体尺寸的缩小,更重要的是整机的稳定性和可靠性的提高!mZM检测VBA

　　下面分别讨论上述7个问题。mZM检测VBA

　　（1）色谱分离的基本原理是有符合统计规律数目的分子群经过不断的两相分配和分子碰撞,利用其分配系数的差异来达到分离的目的。这是一个宏观参数。当分子数目低于这个数目时,就会偏离统计规律而出现所谓的涨落现象。分子数目越少,涨落现象越严重。当分子数目低于103个时,已没有准确的色谱保留规律,因此也就失去了宏观意义下的分离规律。一般地,保证符合统计规律的分子数目是106个。mZM检测VBA

　　例如内径30μm的填充毛细管液相色谱（μ2HPLC）柱或毛细管电泳柱,若分别保持10万/m和40万/m的分离柱效,直接进样时不过载的进样量分别为40pL（1pL=10-12L）和115pL,分子总数分别是112×1012～112×1014和415×1010～415×1012。样品中含量低至1～0.01μL/L（对μ2HPLC）或低至20～0.2μL/L（对CE）的组分就不能满足106个分子的数目要求,分离过程中就会出现上述问题。所以,上述分离系统对浓度高于这个指标的样品分离时可以有重复的保留时间。如果考虑检测方面的限制[参见下述的（3）和（4）>,痕量分析中用粗内径的填充色谱柱总是优于微型色谱柱。mZM检测VBA

　　为了能进行痕量分析,微型分离分析系统往往采用样品预浓缩技术以补偿浓度灵敏度的不足。但为此而发展的技术也同样适用于常规分离分析系统,同样可以提高常规仪器的灵敏度,除非样品量受到严格限制。mZM检测VBA

　　（2）45年前的色谱柱理论已经指出,毛细管开口柱的内径越小,或填充柱的填料粒度越小,色谱柱的分离效率就越高。毛细管电泳亦然,只是理论上有些不同,如有散热问题和塞子流型的特点。微型化中普遍采用的细内径分离柱并不是微型仪器的专利,所能达到的高柱效也不是最近才认识到的。如果在现有常规仪器中使用这种等效内径的色谱柱,再适当改进进样技术和检测器,就会有与微型色谱或芯片电泳同样的单位柱长的柱效,同时还可以有极高的总分离效能,因为常规仪器中分离柱的长度很少受限,而高的分离效能才是真正有意义的。所以,微型色谱和芯片毛细管电泳用短分离柱而有快速分离的特点,并不是它真正的优点,因为用同样尺寸的分离柱可以分别在常规色谱和毛细管电泳上实现同样的效果。mZM检测VBA

标签: 色谱仪器

色谱仪器气相色谱和液相色谱微型化中的关键问题_色谱仪器

液相色谱仪的操作与基线问题处理

高效液相色谱仪适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中针对这种精密而又运用广泛的科学仪器。mZM检测VBA

mZM检测VBA

下面我们来聊一聊基线。HPLC常见的基线问题主要有基线漂移以及基线噪音。mZM检测VBA

基线漂移mZM检测VBA

线漂移基线漂移是色谱工作者普遍遇到的问题。一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要30min的平衡时间，如果用了缓冲溶液、缓冲盐，或者在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长，仍然发现基线漂移，原因可能有以下几种：mZM检测VBA

1、柱温波动mZM检测VBA

控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。mZM检测VBA

2、流通池被污染或有气体mZM检测VBA

用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(尽量断开柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。mZM检测VBA

3、紫外灯能量不足mZM检测VBA

更换新的紫外灯mZM检测VBA

4、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。mZM检测VBA

基线噪音mZM检测VBA

对于紫外检测器,氘灯光源打开后要预热30min以上,基线才能稳定。噪声是指与被测物无关的检测器输出信号的随机扰动变化,分短期噪声和长期噪声两种。mZM检测VBA

基线噪音(规则的)mZM检测VBA

产生基线噪音的原因有：在流动相、检测器或泵中有空气;漏液;流动相混合不完全;温度影响(柱温过高,检测器未加热);在同一条线上有其他电子设备;泵振动。mZM检测VBA

了避免基线噪音,在正式进样之前,需要对流动相脱气;冲洗系统以除去检测器或泵中的空气;检查管路接头是否松动;泵是否漏液;是否有盐析出和不正常的噪音,如有必要,更换泵密封;用手摇动使溶剂混合均匀或使用低粘度的溶剂减少差异或加上热交换器;有其他电子设备时断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正;泵振动时在系统中加入脉冲阻尼器。mZM检测VBA

基线噪音(不规则的)mZM检测VBA

(1)漏液：检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封,检查流通池是否漏液。mZM检测VBA

(2)流动相污染、变质或由低质溶剂配成：检查流动相的组成。mZM检测VBA

(3)流动相各溶剂不相溶：选择互溶的流动相。mZM检测VBA

(4)检测器/记录仪电子元件的问题：断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。mZM检测VBA

(5)系统内有气泡：用强极性溶液清洗系统;检测器内有气泡,清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器。mZM检测VBA

(6)流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音):用硝酸清洗流通池;mZM检测VBA

(7)检测器灯能量时不足更换灯;mZM检测VBA

(8)色谱柱填料流失或阻塞:更换色谱柱。mZM检测VBA

(9)流动相混合不均匀或混合器工作不正常:维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,不建议使用泵的混合装置。mZM检测VBA

高效液相色谱仪操作步骤如下：mZM检测VBA

1)过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.mZM检测VBA