液相色谱仪是一种常用的分析仪器,主要由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成,被广泛用于生物医学、环境化学、石油化工等领域中。 1、柱压高原因 (1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内; (2)样品污染沉积。处理对于第一种情况先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。 2、气泡溢出 流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0~3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。 3、既无压力指示,又无液体流过 (1)泵密封垫圈磨损; (2)大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。 4、压力波动大,流量不稳定 原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。 5、出峰不佳,峰分叉 (1)色谱柱被污染; (2)柱头填料塌陷。处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。t7D检测VBA
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高效液相色谱仪高压输液系统由哪些组成?
高效液相色谱仪高压输液系统由储液器、溶剂吸滤器、高压输液泵、脱气装置和梯度洗脱装置等组成。t7D检测VBA
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一、储液器: 1~2L的玻璃瓶。 二、溶剂吸滤器: 采用Ni合金材质,孔约0.45um,防止颗粒物进入泵内。 三、高压输液泵: 1、要求: (1)流量准确可调,可调范围宽。流动相流速为0.5~2mL/min,泵最大流量范围为5~10mL/min。 (2)耐高压,输出压力常达30~60MPa。 (3)输出流量稳定。 (4)结构材料应耐化学腐蚀。 2、类型: (1)恒压泵。 (2)恒流泵:恒流泵使用广泛,有单活塞往复泵和双活塞往复泵。 3、操作注意事项: (1)防止固体微粒进入泵内。 (2)流动相不应含有腐蚀性物质。 (3)防止储液器内的流动相用完。 (4)不超过规定的最高压力。 (5)流动相一般应该先脱气。 四、梯度洗脱装置: 1、等度洗脱:在一分析周期内流动相组成保持恒定,适合分析组分数目较少和性质差别不大的样品。 2、梯度洗脱:在一个分析周期内按一定程序连续变化流动相的浓度配比、极性、PH值和离子强度。可缩短分析时间,提高分离度,改善峰形,提高检测灵敏度。用来分析组分数目多和性质相差较大样品。 五、脱气装置: 将气体从溶剂中除去,有离线超声波振荡脱气、在线惰性气体鼓泡吹扫脱气和在线真空脱气等装置。t7D检测VBA
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