如何正确的选择毛细管色谱柱4gC检测VBA 1、柱长度的选择4gC检测VBA 分辨率与柱长的平方根成正比。在其他条件不变的情况下,为取得加倍的分辨率需有4倍的柱长。较短的柱子适于较简单的样品,尤其是由那些在结构、极性和挥发性上相差较大的组分组成的样品。4gC检测VBA 一般来说：4gC检测VBA 15m的短柱用于快速分离较简单的样品，也适于扫描分析；4gC检测VBA 30m的色谱柱是zui常用的柱长，大多数分析在此长度的柱子上完成；4gC检测VBA 50m、60m或更长的色谱柱用于分离比较复杂的样品。4gC检测VBA 应该注意，柱长增加分析时间也增加。4gC检测VBA 2、柱内径的选择4gC检测VBA 柱径直接影响柱子的效率、保留特性和样品容量。小口径柱比大口径柱有更高柱效，但柱容量更小。4gC检测VBA 0.25mm：具有较高的柱效，柱容量较低。分离复杂样品较好。4gC检测VBA 0.32mm：柱效稍低于0.25mm的色谱柱，但柱容量约高60%。4gC检测VBA 0.53mm：具有类似于填充柱的柱容量，可用于分流进样，也可用于不分流进样。4gC检测VBA 当柱容量是主要考虑因素时（如痕量分析），选择大口径毛细管柱较为合适。4gC检测VBA 3、液膜厚度的选择4gC检测VBA 液膜厚度影响柱子的保留特性和柱容量。厚度增加，保留也增加。4gC检测VBA 0.1～0.2μm ：薄液膜厚度的毛细管柱比厚液膜的毛细管柱洗脱组分快，所需柱温度低，且高温下柱流失较小，适用高沸点的化合物的分析。4gC检测VBA 0.25～0.5μm ：常用的液膜厚度。4gC检测VBA 0.6～5.0μm : 厚液膜，对分析低沸点的化合物较为有利。4gC检测VBA 色谱柱利用色谱柱先将混合物分离，然后利用检测器依次检测已分离出来的组分。色谱柱的直径为数毫米，其中填充有固体吸附剂或液体溶剂，所填充的吸附剂或溶剂称为固定相。与固定相相对应的还有一个流动相。流动相是一种与样品和固定相都不发生反应的气体，一般为氮或氢气。待分析的样品在色谱柱顶端注入流动相，流动相带着样品进入色谱柱，故流动相又称为载气。载气在分析过程中是连续地以一定流速流过色谱柱的；而样品则只是一次一次地注入，每注入一次得到一次分析结果。4gC检测VBA
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在实验过程中经常遇到的情况：4gC检测VBA
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(1) 新的色谱柱，直接上分析条件来分析样品，发现分离情况不稳定。4gC检测VBA
(2) 新的色谱柱，使用中发现压力突然升高。4gC检测VBA
(3) 新的色谱柱，发现分离度、保留时间发生了变化。4gC检测VBA
(4) 色谱柱使用不频繁，一开始分析样品效果比较好，但是，在使用过程中发现柱效下降快、峰形异常的情况。4gC检测VBA
(5) 色谱峰形异常，基线不稳。4gC检测VBA
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当发生以上情况，请仔细检查，是否有某个操作疏忽了？4gC检测VBA
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1）测试柱性能4gC检测VBA
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通常情况下，我们建议用户在拿到色谱柱后，件事情就是在一台性能完好的仪器系统上，按照厂家说明书对色谱柱进行柱效测试。其实，对于一个合格的色谱分析工作者来说，拿到一根新色谱柱，要开始一个课题之前，都会这样做，目的有二：1、了解色谱柱之前的情况并判断色谱柱是否正常。2、将检测结果小心保存， 当实验过程中发现异常时，在检测柱效进行对比，来进一步排查原因。4gC检测VBA
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2）当反相使用高浓度缓冲盐时，注意过渡4gC检测VBA
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在使用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂时，一定要注意应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，造成系统堵塞。另外，在发现系统压力升高异常时，要仔细检查，段段排除包括保护柱、混合器、管路或者流通池等。4gC检测VBA
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3）当更换色谱柱时，原来的实验情况发生变化4gC检测VBA
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首先，如果之前开发方法时色谱柱已经做过别的样品，那么之前的样品或使用的流动相对这个样品分析可能有干扰，只能重新找条件。建议：开发方法时使用新的色谱柱。（其次，如果是更换了品牌发生这样的情况，可能是由于不同品牌的键合技术不同，造成了选择性的细微差异 ，需要调整条件，并再次确定出峰顺序（有些样品的洗脱顺序会改变）。再次，如果是更换了同品牌型号的新的色谱柱发生这种情况，请检查之前分离时目标与杂质的分离度是否符合要求（Rs大于1.5），如果一开始只是勉强分开（Rs小于1.5），那只能说明方法没有优化好，需要再次进行优化。4gC检测VBA
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4）样品及前处理4gC检测VBA
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样品要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。流动相中所使用的各种有机溶剂要使用色谱纯，配流动相的水应该是超纯水或双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。4gC检测VBA
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5）色谱柱基线问题4gC检测VBA
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通常情况，基线问题是由于系统或者流动相引起的，和色谱柱关系不大。4gC检测VBA
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可能导致的原因：4gC检测VBA
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（1）泵头进气泡4gC检测VBA
（2）系统污染4gC检测VBA
（3）流通池漏液4gC检测VBA
（4）流动相使用的某成分易挥发不稳定（检测波长不合适）4gC检测VBA
（5）检测波长低，水的质量不好等等4gC检测VBA
（6）色谱柱冲洗保养4gC检测VBA
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当使用了缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇水溶液冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入至少10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。还有就是不能在这个工作上面打折扣，否则，一些保留强的杂质没有洗脱下来，只能是给后面的工作带来更大的麻烦。如色谱柱要长时间保存，可以储存于纯甲醇或乙腈中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度选择室温。4gC检测VBA 通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到zui佳分离效果。 手性色谱柱的分类及应用 迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。 根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer提出了手性色谱柱的分类体系： 第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。 第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。 第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。这类手性色谱柱中zui典型的是由Armi教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。 第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。 第5类：蛋白质型手性色谱柱。手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。
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