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色谱柱安装时需要注意的事项及操作规程

时间:2025-04-15 08:14:46  来源:  作者:

色谱柱安装时需要注意的事项

   色谱是一种分离分析手段,分离是核心,因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快等。色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形、U形管等形状。液相色谱通常均采用填充柱。色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相,以及色谱柱的制备和操作条件。下面介绍色谱柱安装时需要注意的事项。

  色谱柱的安装:N0x检测VBA

  1)将液相色谱装置中的流动相完全置换后再连接色谱柱,并完全排出流路内的空气。N0x检测VBA

  装置内的液体和所使用的流动相不能相溶的情况下,使用双方都能相溶的液体做过渡。比如从水置换到氯仿的情况,就需要使用丙酮做过渡,才能完全置换。N0x检测VBA

  将盐溶液置换成有机溶剂的时候,需要通过纯水、丙酮的顺序来进行置换。相反,从有机溶剂转换成盐溶液的情况下,需要通过丙酮、纯水的顺序置换。N0x检测VBA

  不仅仅是泵,流动相流动的所有流路都必须进行置换。例如,注入样品的情况,软管内的液体也需要置换。另外,如果使用压力计等别的软管的情况,取下来的管子也必须由流动相洗净后才能继续使用。N0x检测VBA

  2)色谱柱保存方法不对或者长期不使用的情况下,色谱柱的出入口可能会有空气残留。这种情况下,必须先把空气完全排出后才连接到装置中。N0x检测VBA

  避免快速加热,加热温度不要超过色谱柱的较高负荷温度。N0x检测VBA

  把柱子入口侧的螺栓打开,然后加温(一般加温到手心感到温暖的程度就足够了),等液体满出来以后接到装置上。然后,打开出口处的螺栓,用泵送液,等确认出口处有液体流出后,连接到装置中。这样操作,就算后面再连接一根色谱柱也能完全除去空气。N0x检测VBA

  3)在泵运作的时候连接色谱柱。确保能让流动相按照色谱柱上箭头的方向流动的状态连接色谱柱。N0x检测VBA

  4)色谱柱加温使用的时候,先用0.2~0.3mL/min的低流量一边送液一边升温。达到所定温度后,再渐渐的增加流量至测定流量。N0x检测VBA

  5)色谱柱需要安定时间。连接到装置中立即进行测试的情况下,第一次很难得到好的分析结果。N0x检测VBA

标签: 色谱柱
色谱柱色谱柱安装时需要注意的事项_色谱柱

色谱柱的维护方法

  色谱柱的使用寿命,除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关系外,最主要的是与日常的维护密切相关。色谱柱的使用寿命主要是柱效和柱压两个指标来衡量,如果一支色谱柱柱效太低或柱压太高,通常被认为该色谱柱已经结束。因此,延长色谱柱使用寿命的关键是,消除引起柱效下降和柱压升高的因素。以下是色谱柱的维护方法:N0x检测VBA

  一、流动相的PH应在使用的范围内N0x检测VBA

  流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂,使柱效下降,使用寿命变短。由于流动相的PH控制不当而对色谱柱造成的损害,通常很难是色谱柱恢复,因此必须认真对待,严格控制流动相的PH值。N0x检测VBA

  二、去除样品和流动相中的固体颗粒N0x检测VBA

  样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,筛板被堵住不仅会引起柱压的升高,而且也会引起柱效下降,因为筛板的堵塞会引起液流不均,导致色谱峰型拖尾、变宽,从而使柱效下降。因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析样品前对样品进行针筒过滤,流动相过0、45μm滤膜。N0x检测VBA

  三、使用保护柱或在线过滤器N0x检测VBA

  样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质,因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质,这些固体颗粒被流动相带入色谱柱,堵塞筛板,导致柱压升高、柱效下降。保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱孔径相同,因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱,有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大比例,因此,除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。N0x检测VBA

  如果色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的,可选择以下方式进行补救:N0x检测VBA

  1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min、N0x检测VBA

  2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器,然后反向使用。N0x检测VBA

  四、正确使用缓冲盐N0x检测VBA

  缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,因此缓冲盐使用不当会使其析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升;同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展,使色谱柱的保留能力下降,柱效降低。缓冲盐析出后,去除非常困难,因此,正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。N0x检测VBA

  正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出,因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话:使用前要过滤,使用后要冲洗。具体方法如下:N0x检测VBA

  1、等度条件:使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1、0ml/min流速冲洗60min;使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0、2ml/min流速冲洗色谱柱过夜。N0x检测VBA

  2、梯度条件:用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1、0ml/min流速冲洗60min,再用该过渡流动相以1、0ml/min冲洗色谱柱120min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出。N0x检测VBA

  注意:过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同,区别只是过渡流动相不含缓冲盐。N0x检测VBA

  3、缓冲盐析出的补救方法:N0x检测VBA

  方案1:用甲醇/20/80以1、0ml/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120minN0x检测VBA

  方案2:用甲醇/水=20/80以0、2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。N0x检测VBA

  五、防止强保留物质在色谱柱上存留N0x检测VBA

  强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积,对样品中的化合物产生额外的保留行为,不仅引起峰型变宽、拖尾,使柱效下降,同时也会引起保留时间的变化,累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应,需要一定的时间才会体现出来,但对许多药品特别是复杂样品而言,很难判断其是否是含有强保留物质,因此要防止强保留物质的累积,需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙氰清洗色谱柱。N0x检测VBA

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色谱柱色谱柱的维护方法_色谱柱

色谱柱的再生

  高效液相柱是消耗品,会随使用时间或进样的次数增加,出现色谱峰高降低,峰宽加大或出现肩峰,柱效下降。需要定期进行彻底清洗和再生。

  1、反相柱N0x检测VBA

  分别用甲醇:水=90:10、纯甲醇、二氯甲烷等溶剂着流动相,依次冲洗,每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积。然后再以相反的次序冲洗。N0x检测VBA

  2、正相柱N0x检测VBA

  分别用正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇等溶剂做流动相,顺次冲洗,每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积(异丙醇粘度大,可降低流速,避免压力过高)。注意使用溶剂的次序不要颠倒,用甲醇冲洗完后,再以相反的次序冲洗至正己烷。所有的流动相必须严格脱水。N0x检测VBA

  3、离子交换柱N0x检测VBA

  长时间在缓冲溶液中使用和进样,将导致色谱柱离子交换能力下降,。用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生,反之,用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生。N0x检测VBA

  用户还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向和反方向冲洗。但再生后的色谱柱柱效是不可能恢复到新柱的水平的。N0x检测VBA

  如果柱子装反了,可以调回来,但可能会造成柱内担体塌陷。在不得已的情况下尽量不要反装色谱柱。N0x检测VBA

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色谱柱色谱柱的再生_色谱柱

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