细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式，一种是在强启动子条件下的高效表达，由于蛋白的过度表达;AnE检测VBA
使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲，以固体颗粒的形式堆积于胞间质中，这就是所说的包涵体;AnE检测VBA
另外一种是间质内的可溶性表达，即可以发生正常折叠，具有生物活性。AnE检测VBA
一般情况下，细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。AnE检测VBA
超声破碎的条件一般是300w，10s/10s，20分钟，具体条件可根据自身情况而定。AnE检测VBA
超声前菌体的准备：菌液离心后，先用PBS将菌沉淀洗2-3遍;AnE检测VBA
然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体，裂解液的成分：AnE检测VBA
50mMTris-HCl,pH8.0,2mMEDTA，100mMNaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%TritonX-100。切记冰浴超声！AnE检测VBA
如何判断是否超声完全，根据经验，一般有以下几个方面：AnE检测VBA
1，外观判断：超声前菌悬液是浑浊的，超声完全后变的透明、清澈。AnE检测VBA
2，液体的粘性：超声后菌液从枪头滴下不粘连。AnE检测VBA
3，高速离心：有用高速离心检测超声破碎程度的（一般用6,000g10min,比一般离心收集菌体的转速高一点）。沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。AnE检测VBA
4，染色：破碎后的菌液涂片，革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟，镜检。AnE检测VBA
（超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染）AnE检测VBA
一些需要注意的问题：AnE检测VBA
1，蛋白以包涵体形式表达，追求的是高破碎率，要求细胞碎片很小;AnE检测VBA
而另一种蛋白是可溶形式表达，所以细胞碎片不能很小，两种情况要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分离。AnE检测VBA
2，如果超声时出现黑色沉淀，说明超声功率太强。AnE检测VBA
3，超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。AnE检测VBA
4，尽量防止泡沫的产生。AnE检测VBA
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超声波细胞破碎仪关于超声波细胞破碎仪的相关注意问题介绍_超声波细胞破碎仪
细胞破碎仪应用
细胞破碎仪就是将电能通过换能器转换为声能，这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡，这些小气泡迅速炸裂，产生的象小炸弹一样的能量，从而起到破碎细胞等物质的作用。
细胞破碎仪通过水介质的空化作用，使细胞等结构并不是十分紧密的物料发生破碎、分离。效果好，效率高。AnE检测VBA
超声波细胞破碎仪是一种利用超声波在液体中产生空化效应的多功能、多用途仪器。它能用于多种动植物病毒、细胞细菌及组织的破碎，超声波细胞破碎仪同时可用来乳化分立、匀化提取、消泡清晰、纳米材料的制备、分散及加速化学反应等。先欧超声波细胞破碎仪被广泛应用于生物学、微生物学、物理学、动物学、农学、制药化工、污水处理、纳米材料等领域。AnE检测VBA
细胞破碎仪应用：AnE检测VBA
1.细胞破碎/裂解AnE检测VBA
2.抽提蛋白、核酸AnE检测VBA
3.修剪DNA/RNAAnE检测VBA
4.纳米技术研究AnE检测VBA
5.染色质免疫沉淀技术AnE检测VBA
6.样品均质、乳化AnE检测VBA
7.其它样品处理AnE检测VBA
细胞破碎仪注意事项：AnE检测VBA
1.接口处一定要擦干，如果有水，将可能使研磨后旋开困难AnE检测VBA
2.适配器固定时一定要放在正确位置并旋紧，放下安全锁，一面出现安全事故;研磨声音异常，应立即停止，检查是否出现松动AnE检测VBA
3.放入样品宜少不宜多，以免研磨不充分AnE检测VBA
4.适配器旋开困难时，可敲击底部数下，或者耐心等待AnE检测VBA
5.防止冻伤AnE检测VBA
6.用后清洁整理AnE检测VBA
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