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实用小贴士之液相色谱柱如何使用液相色谱操作规程

时间：2025-04-14 16:09:55 来源：作者：

色谱柱是高效液相色谱仪的重要组成部分，在色谱仪分析系统中起着分离作用，是色谱分析的核心部件，对高效液相色谱柱的正确使用不仅能延长色谱柱的使用寿命，还能有效保证实验结果。7W7检测VBA

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以下简单介绍液相色谱柱7W7检测VBA

在使用过程中应当注意的问题7W7检测VBA

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性能测试7W7检测VBA

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新色谱柱使用前，应进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考依据 (柱性能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异有所不同，在测试中需保证方法一致性）。7W7检测VBA

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流动相的配制7W7检测VBA

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液相色谱是通过样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：7W7检测VBA

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流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中（或长时间保留在柱中）。7W7检测VBA
流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应。7W7检测VBA
流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时既能得到好的分离效果，同时又降低柱压，延长柱子的使用寿命（可运用提高温度的方法降低流动相的黏度）。7W7检测VBA
流动相的物化性质与使用的检测器相适应。7W7检测VBA
流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。7W7检测VBA
流动相配制好后，一定要进行脱气，除去溶解在流动相中的微量气体。7W7检测VBA

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新色谱柱使用前冲洗步骤7W7检测VBA

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1、首先查看色谱柱的说明书，注意色谱柱封存的溶剂、推荐流速、pH值、耐受柱压、及使用温度等信息。7W7检测VBA

2、如分析使用的流动相与色谱柱内储存的溶剂混溶，可以直接使用流动相参照色谱柱说明书中推荐的流速、温度等条件冲洗色谱柱20倍柱体积以上。如果分析条件使用的流动相与色谱柱内储存的溶剂不混溶，请选择与色谱柱内储存溶剂和流动相都混溶的溶剂，作为置换溶剂，逐步置换到分析使用的流动相。每次置换均应冲洗色谱柱20倍柱体积以上。7W7检测VBA

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日常使用注意事项7W7检测VBA

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1、请使用HPLC级别以上的试剂作为流动相。7W7检测VBA

2、流动相要用0.45um孔径以下的微孔滤膜滤过。7W7检测VBA

3、流动相的pH值不能超出色谱柱的适用范围。7W7检测VBA

4、注意流动相的流动方向要与色谱柱标识的方向一致。7W7检测VBA

5、容易滋生微生物的流动相不要存放过久，要及时换新，以免微生物滋生污染色谱柱。7W7检测VBA

6、色谱柱分析结束后要及时彻底冲洗。7W7检测VBA

7、长时间不用的色谱柱要将流动相置换为色谱柱保存的溶剂，并两端用堵头封死保存。7W7检测VBA

8、色谱柱要避免剧烈碰撞、跌落等。7W7检测VBA

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流动相流速的选择7W7检测VBA

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因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不用的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求较佳柱效，应使用zui佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1mL/min，对于内径4.0mm柱，流速0.8mL/min为更佳。当选用zui佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间（如使用反相柱时，可适当增加有机试剂甲醇或乙腈的含量）。7W7检测VBA

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液相色谱柱在色谱分析中起着至关重要的角色，是样品分离的核心，正确使用色谱柱才能达到更好的理想的分离效果，提高色谱柱的使用寿命。7W7检测VBA

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岛津液相色谱仪LC-407W7检测VBA

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融合“AI”与”loT”尖端技术的液相色谱仪7W7检测VBA

诊断精灵＆修复精灵7W7检测VBA

智能判断流动相中气泡的存在，主动排气，自动重启分析序列7W7检测VBA

流速控制精灵7W7检测VBA

智能流量控制，流速逐渐增加至柱温设定值，保护色谱柱7W7检测VBA

流动相精灵7W7检测VBA

储液盘内置传感器，实时监测流动相剩余量7W7检测VBA

溶剂配置精灵7W7检测VBA

自动以任意比例混合流动相，方便、准确地制备出分析所需流动相7W7检测VBA

仓温管控精灵7W7检测VBA

空气循环制冷控温模块，防止热空气进入样品仓形成冷凝水7W7检测VBA

谱峰解析精灵7W7检测VBA

zui小肩缝提取，共流出峰切割，线性范围拓展7W7检测VBA

液相色谱仪对周围的环境的要求

　　液相色谱仪和大多数分析仪器一样，对仪器周围的环境有一定的要求，但没有太特殊的的要求，满足一般分析仪器室的基本条件，就能保证仪器的稳定运行和安全操作。

　　（1）照明：7W7检测VBA

　　室内照明要光线适中，避免阳光直射。为避开直射光线对仪器操作、观测的影响，仪器(显示屏)应侧向光线。实验室窗户要挂窗帘，以便随时调节光照强度。7W7检测VBA

　　（2）通风：7W7检测VBA

　　使用液相色谱仪分析过程中，由于流动相中含有挥发性有机溶剂（甲醇、乙睛等）会产生有害气体，对仪器中的光学元件带来腐蚀，应注意仪器室的通风，以排除室内有害气体、保持空气清新。7W7检测VBA

　　通风主要有两种方式:一种自然通风，定时打开门窗，让内外空气对流;另一种是强制通风，如用通风柜、排风扇等，及时将有害气体排出室外。7W7检测VBA

　　（3）环境温度和湿度：7W7检测VBA

　　适宜的温度和湿度是保障HPLC仪正常运行、性能稳定的必要条件。7W7检测VBA

　　HPLC仪一般要求室温在20一30℃之间，日温度变化2一3℃，不要波动太大，否则，在开机分析时会影响色谱分离;7W7检测VBA

　　夏季一定要控制室温不要超过30℃，温度太高会使流路系统产生气泡，影响检测器的正常工作（如荧光检测器）。室内相对湿度应控制在60%以下。7W7检测VBA

　　（4）供电：7W7检测VBA

　　液相色谱室应设有照明电源和动力电源，动力电可供仪器运行使用。为减少噪音的干扰，仪器应远离瞬时供电的大功率电器设备，如:大型电动设备（超低温冰箱、电烤箱等）、电梯、空调系统等。为保证HPLC输液泵的精度，必须要保证稳定的输人电压，为此，建议色谱室应设有和仪器负荷相当的稳压电源。室内墙上应安装有接地电阻符合要求的地线，用于仪器设备保护性接地的公用地线接地电阻≤4Ω。7W7检测VBA

　　（5）洁净度：7W7检测VBA

　　悬浮于空气中的颗粒物质会对色谱仪器分析带来干扰，使本底和噪声升高，成为分析测试的污染源，直接影响高纯物质的纯度与痕量杂质的分析。7W7检测VBA

标签: 液相色谱仪

液相色谱仪液相色谱仪对周围的环境的要求_液相色谱仪

液相色谱仪进样阀门的清洗

进样阀在进样过程中，必须是非常清洁的，否则得不到较好的结果。进样阀切换到进样位置(Inject)后，要在此位置保持一段时间，使流动相充分冲洗样品定量管，这样可以保证有较高的精确度，而且不用另外再冲洗样品定量管。这种由色谱仪器控制的冲洗显然要比手动冲洗更好些。注意：冲洗需要的流动相体积至少为所进样品体积的10倍。例如，如果取20μL样品至100μL样品定量管中，而流动相此时的流速为1mL/min，则需要在进样位置至少保持12s，即：20μL×10/1000μL·min-1=0.2min=12s。

当样品定量管经过充分的冲洗后，可以将旋柄转回取样位置(Load)，也可以继续保持在进样位置，到下次取样前才切换回取样位置。在切换回取样位置时，将样品进样针或微量样品进样针从进样阀中拔出。7W7检测VBA

为防止交叉污染，正常情况下不必每次进样后都冲洗进样阀注射针导入口。进样阀内根据专利设计的直接连接进样孔，可以使注射针头的前端直接连接到样品定量管的末端，没有其他空间供样品残留。这样在下一次进样时，就不会有上一次残留的样品进入样品定量管。7W7检测VBA

但是在进样针头插入或拔出过程中，会有痕量的样品沉积在针头密封区域。精密的测定显示这种残留有1nL ~ 10nL。这表明进20μL样品，会残留0.005% ~ 0.05%。每次进样后冲洗注射针导入口可以将此残留冲洗干净。冲洗注射针导入口的过程为：设定流动相的流速为0.1mL/min ~ 1mL/min，将注射针导入口冲洗头(Rheodyne部件号7125-054)连接到一只体积相对较大的注射器上，用大量的流动相只在进样位置清洗注射针导入口。这样进入进样阀中的液体绕过样品定量管由样品溢出管5# 口排出。这一过程可以将注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈彻底清洗。而采用注射器完全插入式的冲洗方式，则不能全部清洗上述部分的表面。在取样位置将注射针插入注射针导入口时，针头推动注射针密封圈内少量样品液体(上一次冲洗注射针导入管留下的)进入样品定量管。当该样品液体与所用的流动相组成不同，且同时采用部分充满定量管进样方式时，在高灵敏度的检测器上可能出现怪峰。所以冲洗注射针时可以用流动相冲洗。7W7检测VBA

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