Agilent液相色谱仪标准操作程序液相色谱操作规程

时间：2025-04-14 16:02:12 来源：作者：

　　Agilent液相色谱仪标准操作程序

　　1.目的：建立一个液相色谱的标准操作程序。

　　2.范围：适用于Agilent液相的使用。

　　3.责任：使用Agilent液相的化验员。

　　4.程序

　　4.1工作环境

　　实验室温度为20～27℃，温度变化<3℃/hr，相对湿度<80%，液相色谱仪工作台，长2米、宽0.8米、承重大于80公斤，离墙距离0.3米以上。单相交流220V，(+5%～10%)，50～60Hz，有单独的良好接地。配置稳压电源，功率大于2.5千瓦。

　　4.2使用前的准备

　　4.2.1二次蒸馏水，(建议用0.45微米水相滤膜过滤)；甲醇或乙晴(色谱纯)，(建议用0.45微米有机相滤膜过滤)；其他样品所需流动相，(都需经过0.45微米滤膜过滤)。将上述溶剂放入超声波池，除去气泡，方可使用。

　　4.2.2把流动相放入溶剂瓶中，打开purge阀，单击pump图标，出现参数设定菜单，单击setup选项，进入pump编辑画面，设flow：5ml/min，单击OK；单击pump图标，出现参数设定菜单，单击pump control选项，选中ON，单击OK，则系统开始purge，直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止，切换通道继续purge，直到所有要用通道无气泡为止；单击pump图标，出现参数设定菜单，单击setup选项，进入pump编辑画面，设flow：1.0ml/min，关闭purge valve。单击pump下的的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入阻止分析和关泵的体积，单击OK。

　　4.2.3进行样品前处理(稀释或溶解至所需浓度)。

　　4.3实验步骤

　　4.3.1准备

　　4.3.1.1开启Agilent 1100LC各模块电源。

　　4.3.1.2打开计算机，双击online图标。

　　4.3.1.3从"view"菜单中选择"method and run control"画面，单击"view"菜单中的"show top toolbar","show status toolbar","system diagram","sampling diagram"使其命令前有"√"标志。

　　4.3.2数据采集方法编辑

　　4.3.2.1从“method"菜单中选择"edit entire method"项，选中除"data analysis"外的三项，单击OK，进入下一画面。

　　4.3.2.2在"method comments"中加入方法的信息(如This is for test!)，单击OK进入下一画面。

　　4.3.2.3泵参数设定

　　在"flow"处输入流量1ml/min，在"solvent"处输入流动相中各溶剂所占的比例，也可"insert"一行"timetable",编辑梯度。在"pressure limits max"处输入柱子的zui大耐高压，以保护柱子，单击OK进入下一画面。

　　4.3.2.4柱温箱参数设定

　　在"temperature"下面的方框内输入所需的温度，并选中它点击"more>>"键，如图所示，选中"same as left"使柱温箱的温度左右一致，点击OK进入下一画面。

　　4.3.2.5 VWD检测器参数设定

　　在"wavelength"下方的空白处输入所需的检测波长，在"peak width(response time)"下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，如>0.1min 。在"timetable"中可以"insert"一行，可以输入随时间切换的波长。

　　4.3.2.6在"run time checklist"中，选中"data acquisition"，单击OK。

　　4.3.2.7单击“method"菜单，选中"save method as"，输入一方法名，单击OK。

　　4.3.2.8从"run control"菜单中选择"sample info"选项，输入操作者姓名，在"data file"中选择"manual"或"prefix"。

　　4.3.2.9从"instrument"菜单中，选择"system on"。

　　4.3.2.10单击OK，等仪器ready，基线平稳，从"method"菜单中选择"run method"，进样。

　　4.3.2.11进样时，阀门位置处于"inject"位置，进样针取样量应为所规定体积的三倍，用滤纸拭净针头表面残留液，进样时要轻而快，进样完毕应快速将阀门搬至"load"位置，进样完毕，数分钟后将进样针拔下，阀门回复到"inject"位置。 4.3.3数据分析方法编辑

　　4.3.3.1从"view"菜单中，单击"data analysis"进入数据分析画面。

　　4.3.3.2从"file"菜单中选择"load signal"选项，选中您的数据文件，单击OK。

　　4.3.3.3做谱图优化，从"graphics"菜单中选择"signal options"选项，从"ranges"中选择"auto scale"及合适的显示时间，单击OK，或选择"use ranges"调整。反复进行，直到图的比例合适为止。

　　4.3.3.4积分

　　4.3.3.4.1从"integration"中选择"auto integrate"，如积分结果不理想，再从菜单中选择"integration events"选项，选择合适的"slope sensitivity","peak width","area reject","height reject"。

　　4.3.3.4.2从"integration"菜单中选择"integrate"选项，则数据被积分。

　　4.3.3.4.3如积分结果不理想，则重复上两步动作，直到满意为止。

　　4.3.3.4.4单击左边"√"图标，将积分参数存入方法。

　　4.3.3.5打印报告

　　4.3.3.5.1从"report"菜单中选择"specify report"选项，进入。

　　4.3.3.5.2单击"quantitative results"框中"calculate"右侧的黑三角，选择所需的报告形式，其他选项不变，单击OK。

　　4.3.3.5.3从"report"菜单中选择"print report"，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击"report"底部的"print"钮。

　　4.3.4关机

　　4.3.4.1关机前，先用水和有机溶剂对系统进行梯度冲洗，然后再用有机溶剂冲洗系统，然后关泵(适用于反相色谱柱)。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]

　　4.3.4.2退出化学工作站，及其他窗口。

　　4.3.4.3关掉Agilent1100电源开关，计算机(用shut down关)。

　　4.4.1色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死。

　　4.4.2对于手动进样器，当使用缓冲液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次。

　　4.4.3流动相使用前必须过滤、超声，不能使用多日存放的纯化水(易长菌)，应每天更换纯化水。

高效液相色谱仪常用问题解决方法

　　在化学、工业行业中高效液相色谱仪被广泛使用，用户在使用中偶尔也会出现一些问题，下面就一些常见液相色谱仪的故障问题为用户进行总结分析。　　第一、液相色谱仪中有气体冒出　　如果液相色谱仪有气泡流出，不管是通过关闭色谱仪泵或者是打开色谱仪下阀，都没解决气泡产生的问题，有可能是机器的过滤器长期的受到了腐蚀的影响，使霉菌等物质阻塞了液相色谱仪。　　故障解决办法：一般情况下用超声波来清洗5-10分钟左右，或者是可以将过滤器浸泡在硝酸钠溶液当中轻微的摇晃，然后用清水进行冲洗就可以了。进行完上述操作后，如果色谱仪还是会有气泡的话，只能证明过滤器内部被腐蚀的非常严重，则要用色谱用甲醇在冲洗半个小时然后超声波清洗半小时后用清水清理干净泄压阀关闭就可以　　第二、液相色谱仪出现无指示的故障　　色谱仪当出现无指示的故障时，主要原因是泵的垫圈有了的磨损和大量的气体进入到了泵体当中。　　故障解决办法：检查是色谱仪垫圈出了问题，更换一个垫圈即可。如果是出现了第二种问题，在液相色谱泵的作用下在泵的出口处将空气尽快的抽出。如果问题还是无法解决这个时候就可以，拆下色谱仪当中的单向阀，进行超声波的清洗过程。CxU检测VBA

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液相色谱系统故障之逻辑推理

　　对液相色谱系统的故障作逻辑推理是快速纠正毛病的关键。某些一目了然的故障，如接头漏液紧紧螺丝就可以。有些故障一时难以捉摸，如峰拖尾的问题一时找不到原因。遵循有规则的模式解决问题十分重要，而不是胡乱地逐一检查每个部件。CxU检测VBA

　　1、粗看一遍。CxU检测VBA

　　第一，故障发生后要给系统做一次快速的检查。沿着流动相贮存器经系统到放空这条流路看一遍，有什么问题一般都能发现；泵的入口处有无气泡，接头漏无，压力是否比平常高？还有无其他的反常现象？第二，确证所设定的条件是否合适。检查流动相，流速，压力，柱子种类，检测器和记录器，调整这些方面对方法的适应性。这两步检查仅仅需要几分钟的时间，但能事半功倍。CxU检测VBA

　　2、系统有什么新变化？CxU检测VBA

　　例如开机后进行过维修，更换零部件，加入新流动相，分析过特殊样品，改变方法，停过电等。如有其他操作者在实验室中可询问一下他们是否动过仪器，或随手按过什么按钮。最后认真归纳一下系统发生的每一个变化，这样一般能解决问题。CxU检测VBA

　　3、对照参考比条件。CxU检测VBA

　　系统出了问题在色谱图上都有反应，再做一次试验参考色谱图。如果参考色谱图是好的，是否样品出了问题；如果参考色谱图不好，那么系统有了故障。也有问题不在色谱图中反映出来，如压力变化。这时应弄清流动相及其流速是否对头，不必做试验参考色谱图。CxU检测VBA

　　4、逐步分析并解决问题。CxU检测VBA

　　如果上述尝试无效，可将系统做一次做一种变化，并同时记录下来。变化无效的一般无问题，有效的应做上记号，然后根据情况，做出调整整个或局部部件的决定。CxU检测VBA

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