应该如何选择紫外可见分光光度计测量条件光度计操作规程

时间：2025-04-14 15:22:49 来源：作者：

　　【检测VBA 使用手册】紫外分光光度计是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。紫外可见分光光度计是一种使用频率较高的光谱分析仪器，在使用过程中，争取选择合适的测量条件对于结果的准确性是非常重要的。

　　狭缝宽度

　　选择原则：仪器的狭缝宽度应小于被测组分吸收带半高度的1/10，以减小狭缝宽度时，被测组分的吸光度不再增大为准。

　　狭缝宽度影响测量的灵敏度和标准曲线的线性范围。对于给定仪器，增大狭缝的宽度就是增加入射光的谱带宽度，降低单色光的纯度，在一定范围内使测量灵敏度下降，并使标准曲线的线性变差。但狭缝宽度太小的话入射光强太弱，仪器噪声所占比列增大，不利于测量。简单地说就是：

　　狭缝宽度大，入射光强度大，单色性差，A与c线性差；

　　狭缝宽度小，入射光强度弱，不利于测量。

　　吸光度的范围

　　任何仪器的测量结果都存在一定的误差，对于分光光度计而言，由于仪器噪音的影响，仪器测量T值过程中，存在一定幅度的偶然误差ΔT，它对测定结果的相对误差的影响可由Lambret-Beer定律导出。由朗伯-比尔定律可知，吸光度A、待测溶液浓度c和透光率T为负对数，因此不同的透光率下，相同的测量误差ΔT引起的吸光度误差和浓度误差是不同的。所以，在紫外-可见分光光度法的测量过程中应选择适宜的吸光度范围以减少测量误差。

　　仪器的ΔT=0.5%时，只有透光率T在20%~65%时，即吸光度A在0.2～0.7范围时，浓度的测量相对误差较小(△c/c%<2%)。且透光率T=36.8%，吸光度A=0.434时，可得浓度相对误差的极小值。

　　对高精度的分光光度计，ΔT可低达0.01%，误差较小的范围可延伸到高吸收度区(A为-0.17～2)。

　　参比溶液(空白溶液)

　　1.容剂空白：

　　在测量波长下，只有被测组分有吸收，其它组分与显色剂无吸收，可以用溶剂如蒸馏水作为空白溶液。

　　2.试剂空白：

　　在测量波长下，显色剂有吸收，可不加试样溶液而完全按照显色反应的相同条件配制空白溶液。

　　3.试样空白：

　　在测量波长下，其它组分有吸收，显色剂无吸收。

　　4.加掩蔽剂或改变实验条件：

　　在测量波长下，其它组分与显色剂有吸收。加掩蔽剂或改变实验条件，使组分不与显色剂作用，配制溶液作空白。

原子吸收分光光度计的结构说明

　　原子吸收分光光度计分为单光束型和双光束型。其结构可分为五个部分：光源、原子化器、光学系统、检测系统与数据处理系统。

　　1、光源fog检测VBA

　　为测出待测元素的峰值吸收，须采用锐线光源，应满足以下一些要求：辐射强度大、辐射稳定、发射普线宽度窄。空心阴极灯是目前原子吸收光谱仪器使用的主光源，属于辉光放电气体光源。fog检测VBA

　　空心阴极灯是一种由被测元素或含有被测元素的材料制成的圆筒形空心阴极和一个阳极（钨、钛或锆棒），密封在充有低压惰性气体的带有石英窗的玻璃壳内的电真空器件。fog检测VBA

　　当在两极之间施加几百伏的高压，两极之间会产生放电，电子将从空心阴极内壁射向阳极，并在电子的通路上又与惰性气体原子发生碰撞并使之电离，带正电荷的惰性气体离子在电场的作用下，向阴极内壁猛烈地轰击，使阴极表面的金属原子溅射出来，而这些溅射出来的金属原子再与电子、惰性气体原子及离子发生碰撞并被激发，于是阴极内的辉光便出现了阴极物质的光谱。fog检测VBA

　　空心阴极灯的阴极材料的纯度必须很高，内充气体也必须为高纯，以保证阴极元素的共振线附近不含内充气体或杂质元素的强谱线。fog检测VBA

　　空心阴极灯的操作参数是灯电流，灯电流的大小可决定其所发射的谱线的强度。但是需根据具体操作情况来选择灯电流的大小。fog检测VBA

　　通常情况下，空心阴极灯在使用前需预热10~15min。fog检测VBA

　　2、原子化系统fog检测VBA

　　原子吸收光谱中常用的原子化技术是：火焰原子化和电热原子化。此外还有一些特殊的原子化技术如氢化发生法、冷原子蒸气原子化等。fog检测VBA

　　1）火焰原子化系统——火焰原子化器fog检测VBA

　　火焰原子化器由雾化器、雾化室、燃烧器三部分组成。常见的燃烧器有全消耗型和预混合型。目前主要使用的是预混合型燃烧器。fog检测VBA

　　2）、电热原子化系统——石墨炉原子化器fog检测VBA

　　非火焰原子化器中适用广泛的是管式石墨炉原子化器。组成部分为：石墨管、炉体、电源。样品直接放置在管壁上或放置在嵌入管内的石墨平台上，用电加热至高温实现原子化。fog检测VBA

　　3、光学系统fog检测VBA

　　光学系统为光谱仪的心脏，一般由外光路与单色器组成。fog检测VBA

　　外光路可以分为单光束与双光束。单光束系统中，来自光源的光只穿过原子化器，它的优点，能量损失小，灵敏度高，但不能克服由于光源的不稳定而引起的基线漂移。fog检测VBA

　　传统双光束系统采用斩光器将来自光源的光分为样品光束与参比光束，补偿了基线漂移，但能量损失大。fog检测VBA

　　单色器置于原子化器之后，这样可将空心阴极灯阴极材料的杂质发出的谱线、惰性气体发出的谱线以及分析线的邻近线等与共振吸收线分开并防止光电管疲劳。fog检测VBA

　　由于锐线光源的谱线简单，故对单色器的色散率要求不高(线色散率为10-30?/mm)。fog检测VBA

　　4、检测系统与数据处理系统fog检测VBA

　　检测系统包括检测器、放大器、对数转换器及显示装置等。光电倍增管是原子吸收光谱仪的主要检测器，要求在180-900nm测定波长内具有较高的灵敏度，并且暗电流小。目前通过计算机软件控制的原子吸收光谱仪具有很强的数据处理能力。fog检测VBA

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原子吸收分光光度计原子吸收分光光度计的结构说明_原子吸收分光光度计

紫外可见分光光度计的适应性

　　所谓适用性，就是紫外可见分光光度计能满足使用要求的程度。fog检测VBA

　　紫外可见分光光度计适用性的主要内容是由技术指标所决定的。考虑适用性的原则应该是：能满足使用要求，不必苛求。使用紫外可见分光光度计对不同试样进行比对测试时，的波长准确度很重要。但在一般的定量相对测量时，仪器的波长准确度就不是很重要。又如波长重复性，在发表文章时很重要，因为，人家如果重复不了你的数据，有时甚至你自己也重复不了你自己的数据是不行的。fog检测VBA

　　还有杂散光，在分析试样较多、浓度较大时就很重要。因为，它限制被分析试样浓度的上限。当杂散光一时，被测试的试样的浓度越大，分析测试数据偏离比耳定律的程度就越大。所以，在所要求的分析误差一定时，被分析试样浓度的上限就会受到限制。因此，在分析试样品种较多的食品、农业等领域挑选紫外可见分光光度计时，一定要注意挑选杂散光小的仪器。又如光度噪声，它也是分析测试误差的主要来源，且限制被分析试样浓度的下限。在仪器的噪声一定时，被分析测试的试样浓度越低，分析测试的误差就越大。在要求的分析误差一定时，被分析试样浓度的下限就会受到限制。因此，生化、海洋等领域的科技工作者挑选紫外可见分光光度计，就应特别重视光度噪声，要挑选光度噪声小的仪器。fog检测VBA

　　制药行业挑选紫外可见分光光度计，就一定要注重对光谱带宽的挑选。我国和世界各国的药典都明文规定，用于药检的紫外可见分光光度计，其光谱带宽要求为2nm以下。固定光谱带宽的仪器不适用于制药行业使用。应该挑选可调光谱带宽的仪器。科研工作也应考虑选择光谱带宽可调的仪器。fog检测VBA

　　在实际工作中，经常看到有人用高档紫外可见分光光度计专作可见光区的分析测试工作。当工作不需要用紫外分光光度计，用一台价格很便宜的可见分光光度计就行了，购买高级的紫外可见分光光度计是一种浪费。还有制药厂，使用国产的752、754等紫外可见分光光度计作质量控制，而药典规定，用于药检的紫外可见分光光度计的光谱带宽要求在2nm以下，若用光谱带宽≥4nm的752、754等紫外可见分光光度计光谱带宽都在4nm以上这也是不对的。fog检测VBA

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