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高效色谱仪色谱柱的使用事项 色谱仪操作规程

时间:2025-04-14 12:51:59  来源:  作者:
【客服微信qejc21】高效色谱仪色谱柱的使用事项包括色谱柱的平衡、再生和维护等。一、色谱柱的平衡:高效液相色谱仪反相色谱柱是保存在乙腈中,新柱应先用10~20倍柱体积的甲醇或



    高效色谱仪色谱柱的使用事项包括色谱柱的平衡、再生和维护等。PCb检测VBA

    一、色谱柱的平衡:PCb检测VBA

    高效液相色谱仪反相色谱柱是保存在乙腈中,新柱应先用10~20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱,一定确保分析样品所使用的流动相与乙腈-水互溶。每天用足够的时间以流动相平衡色谱柱,会在处理问题方面获得最大的“补偿”,而且色谱柱的寿命会变得更长。PCb检测VBA

    平衡操作步骤:PCb检测VBA

    1、平衡开始时,将流速缓慢提高,用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线。缓冲盐或离子对试剂流速如果较低,需要较长时间来平衡。PCb检测VBA

    2、如果使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水“过渡”。即每天分析开始前,必须先用纯水冲洗30min以上,再用缓冲盐流动相平衡。分析结束后,必须先用纯水冲洗30min以上,除去缓冲盐之后,再用甲醇冲洗30min保护色谱柱。PCb检测VBA

    二、色谱柱的再生:PCb检测VBA

    1、建议用来冲洗色谱柱的溶剂体积:PCb检测VBA

    (1)Ф4×125mm色谱柱:PCb检测VBA

    柱体积为1.6mL,所用溶剂体积为30mL。PCb检测VBA

    (2)Ф4×250mm色谱柱:PCb检测VBA

    柱体积为3.2mL,所用溶剂体积为60mL。PCb检测VBA

    (3)Ф10×250mm色谱柱:PCb检测VBA

    柱体积为20mL,所用溶剂体积为400mL。PCb检测VBA

    2、再生方法:PCb检测VBA

    (1)极性固定相的再生:PCb检测VBA

    正庚烷,乙酸乙酯,丙酮,乙醇,水。PCb检测VBA

    (2)非极性固定相的再生:PCb检测VBA

    水,异丙醇,乙腈,水。PCb检测VBA

    3、注意事项:PCb检测VBA

    (1)在对用NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能以铵根离子形式存在,因此应在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后用水冲洗至碱溶液完全流出。PCb检测VBA

    (2)如果用有机溶剂-水不能完全洗去硅胶表面吸附的杂质,在水洗后加用0.05M的稀硫酸冲洗非常有效。PCb检测VBA

    三、色谱柱的维护:PCb检测VBA

    1、使用预柱、保护柱和分析柱。硅胶在极性流动相和离子性流动相中有一定的溶解度。PCb检测VBA

    2、大多数反相色谱柱的pH值稳定范围是2~7.5,尽量不超过该色谱柱的pH值范围。PCb检测VBA

    3、避免流动相组成和极性的剧烈变化。PCb检测VBA

    4、流动相使用前必须经脱气和过滤处理。PCb检测VBA

    5、如果使用极性或离子性缓冲溶液作流动相,应在实验完毕后冲洗干净色谱柱,并保存于甲醇或乙腈中。PCb检测VBA

    6、氯化物溶剂对色谱柱有一定腐蚀,柱和连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。PCb检测VBA





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凝胶色谱仪凝胶的特征参数有哪些?

  凝胶色谱仪凝胶的特征参数有排阻极限、渗透极限、吸水率、凝胶粒径、床体积和空隙体积等。PCb检测VBA

  一、排阻极限:PCb检测VBA

  指不能进入凝胶色谱柱凝胶颗粒孔内的最小分子的相对分子质量。PCb检测VBA

  二、渗透极限:PCb检测VBA

  指能够完全进入凝胶色谱柱凝胶颗粒孔内的最大分子的相对分子质量。PCb检测VBA

  三、吸水率(溶胀率):PCb检测VBA

  吸水率 = [(m溶胀平衡后凝胶-m干凝胶)/ m干凝胶]×100%PCb检测VBA

  四、凝胶粒径:PCb检测VBA

  软质凝胶粒径较大,为50~150?m。硬质凝胶粒径较小,为5~50?m。凝胶粒径越小,理论塔板当量高度(HETP)越小,分离效率越高。PCb检测VBA

  五、床体积:PCb检测VBA

  指1g干凝胶溶胀后所占的体积。PCb检测VBA

  六、空隙体积:PCb检测VBA

  指凝胶色谱柱凝胶颗粒之间的空隙体积,即死体积V0。PCb检测VBA

  空隙体积一般用平均相对分子质量为2000的水溶性蓝葡聚糖测定。PCb检测VBA

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聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪的介绍

  聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质进行电泳分离,聚丙烯酰胺凝胶具有机械强度好、有弹性、透明、化学性质稳定、对pH和温度变化小、没有吸附、电渗作用小等特点,是一种很好的支持介质。PCb检测VBA

  一、聚丙烯胺凝胶聚合方式:PCb检测VBA

  聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(CH2 = CH-CO-NH2,简称Acr)和交联剂N,N′-甲叉双丙烯酰胺(CH2 = CH-CO-NH-CO-CH = CH2,简称Bis)在催化剂过硫酸铵(AP)和加速剂N,N,N′,N′-四甲基乙二胺(TEMED)作用下聚合交联而成的三维网状凝胶,凝胶孔径大小由丙烯酰胺的浓度决定。PCb检测VBA

  二、电泳类型:PCb检测VBA

  1、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳:PCb检测VBA

  在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,DNA单链的迁移率除与DNA链的长短有关外,更主要的是取决于DNA单链所形成的构象。在非变性条件下,DNA单链可自身折叠形成具有一定空间结构的构象,这种构象由DNA单链碱基决定,其稳定性靠分子内局部顺序的相互作用(主要为氢键)来维持。相同长度的DNA单链其顺序不同,甚至单个碱基不同,所形成的构象不同,电泳迁移率不同。PCb检测VBA

  由于分子的空间结构影响,同等大小的DNA之间的电泳迁移率可相差10%。因此,不能用非变性聚丙烯胺凝胶电泳判断DNA分子大小。PCb检测VBA

  2、变性聚丙烯胺凝胶电泳:PCb检测VBA

  (1)DNA变性:采用加热、极端pH、有机溶剂、尿素或甲酰胺导致DNA解链。PCb检测VBA

  (2)凝胶中加入变性剂:5M的尿素,使DNA为单链线性,变性DNA的移动速度与其碱基组成和序列几乎完全无关。PCb检测VBA

  变性聚丙烯胺凝胶电泳可用于DNA序列分析等。PCb检测VBA

  三、应用:PCb检测VBA

  聚丙烯酰胺凝胶电泳适于分离小分子量蛋白质、小于1Kb的DNA片段和DNA序列分析,装载的样品量大,分辨率高,回收DNA纯度高即能分离长度仅相差0.2%(即500bp中的1bp)的核苷酸分子。PCb检测VBA

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