原子吸收分光光度计的主要分析方法有三种 一,原子吸收火焰法 原子吸收的火焰法作为一种常用的分析方法被广泛的使用,对于一些常见的,含量在一定可测范围内金属元素而言,火焰原子吸收法简单而快捷,结果
原子吸收分光光度计的主要分析方法有三种5j7检测VBA
一,原子吸收火焰法5j7检测VBA
原子吸收的火焰法作为一种常用的分析方法被广泛的使用,对于一些常见的,含量在一定可测范围内金属元素而言,火焰原子吸收法简单而快捷,结果的准确度非常高。5j7检测VBA
二,原子吸收石墨炉法5j7检测VBA
原子吸收石墨炉法是原子吸收应用中经典的方法,一般的石墨炉可以瞬时升温至3000℃,对于一些含量极低的或者一些高温元素的定量检测十分有效,甚至很多仪器和分析专家认为,之所以原子吸收分光光度计没有被淘汰至今还在广泛的适用正是因为原子吸收的石墨炉法的精度及最小检测极限是目前所有测试方法中几乎无可替代的。5j7检测VBA
三,原子吸收氢化物法5j7检测VBA
也称冷原子法,一般用于测定汞、砷之类的元素。5j7检测VBA
所以在原子吸收分光光度计的选择上,我们首先要选定主要是用哪一种方法去做金属元素的含量测定,然后根据测定方法去确定原子吸收分光光度计的配置。5j7检测VBA
如何了解我们需要使用的方法是什么呢?有以下三点必须注意5j7检测VBA
一,测定的金属元素种类5j7检测VBA
二,测定的金属元素的大致含量范围5j7检测VBA
三,测定的金属元素的基体5j7检测VBA
了解了以上三点以后,我们就可以根据不同的元素,不同的含量,不同的基体去选择不同的配置方案。
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5j7检测VBA 事实上,分光
光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和精确度。如EppendorfBiophotometer的准确度≤1.0%(1A)。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动,都是正常的。另外,还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值,离子浓度等:在测试时,离子浓度太高,也会导致读数漂移,因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液,如TE,可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素:由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值可以在0.1-1.5A。在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低,或者过高(超过光度计的测试范围)。最后是操作因素,如混合要充分,否则吸光值太低,甚至出现负值;混合液不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大;换算系数和样品浓度单位选择一致;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。
除了核酸浓度,分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品,A320一般是0。5j7检测VBA
蛋白质的直接定量(UV法)5j7检测VBA
这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。选择Warburg公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质,一般要消除320nm的“背景”信息,设定此功能“开”。与测试核酸类似,要求A280的吸光值至少大于0.1A,较佳的线性范围在1.0-1.5之间。实验中选择Warburg公式显示样品浓度时,发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上,只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%,表明结果非常稳定。漂移的原因是因为Warburg公式吸光值换算成浓度,乘以一定的系数,只要吸光值有少许改变,浓度就会被放大,从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受到平行物质的干扰,如DNA的干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高。5j7检测VBA
比色法蛋白质定量5j7检测VBA
蛋白质通常是多种蛋白质的混合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。5j7检测VBA